Klassikaal: Les 2 BMI

• Biologie
• MBO
• Studiejaar 2

Les 2: PCR

Vandaag:

- uitleg over PCR

- zelf aan de slag met een PCR simulator

Leerdoelen

• Je kan uitleggen wat een polymerase chain reaction (PCR) is en welke stappen hierbij betrokken zijn.
• Je kan de functie van elk component beschrijven (Taq-polymerase, dNTP’s, primers, template-DNA, Mg²⁺, buffer).

Wie weet nog welke stappen er zijn bij PCR?

Waar zou je PCR voor kunnen gebruiken?

Wat is PCR?

een kopieermachine voor DNA

PCR gebeurt niet zomaar - componenten nodig!

Component	Functie
Template DNA	DNA waar een stukje van gekopiëerd wordt
Taq-polymerase	Synthetiseert nieuw DNA
Primers (Forward en reverse)	Korte engelstrengs DNA dat startpunt is voor Taq-polymerase
Mg²⁺	Co-factor voor Taq-polymerase
dNTP's	Bouwstenen om het gekopiëerde DNA te maken
Buffer	Zorgt voor juiste omstandigheden, zodat de reactie goed verloopt.

Componenten in PCR reactie

Sleep de functie naar de juiste componenten.

Template DNA

Mg²⁺

Buffer

Primers

Taq-polymerase

dNTP's

Zorgt voor juiste omstandigheden, zodat de reactie goed verloopt.

Bouwstenen om het gekopiëerde DNA te maken

Startpunt voor Taq-polymerase

Co-factor voor Taq-polymerase

Synthetiseert nieuw DNA 

DNA waar een stukje van gekopiëerd wordt

Stappen in PCR: 1. Denaturatie

Het template DNA enkelstrengs maken (95 C)

Stappen in PCR: 2. Annaeling

Primers binden aan het enkelstrengs DNA (50-65 C). Temperatuur is afhankelijk van de primers.

Stappen in PCR: 3. Extensie

Het synthetiseren en verlengen (extensie) van nieuw stukje DNA door Taq-polymerase en dNTP's (72 C)

Leg in je eigen woorden uit wat de drie stappen van een PCR reactie zijn.

Aan de slag

Wat? Maak de zelfstandige Lesson-Up: Zelfstandig: Les 2 PCR.

Hoe? Dit doe je individueel, bij hulp vraag je het eerst je buurman/buurvrouw.

Hoelang? De hele les, op de laatste 5 minuten na.

Uitkomst? Je bent klaar met de zelfstandige LessonUp en begrijpt een PCR beter.

Klaar? Ga verder met je praktijkvoorbereiding.

Bij je PCR buffer zit o.a. magnesium in. Wat is volgens de simulator de functie van magnesium?

1. Ze verhogen de pH van de oplossing.
2. Ze zorgen voor de afbraak van DNA.
3. Ze stabiliseren het DNA en activeren Taq-polymerase.
4. Ze maken het DNA onzichtbaar voor enzymen.

Welke combinatie van stoffen is nodig om tijdens PCR het DNA succesvol te kopiëren?

1. Primers, dATPs, dTTPS, dCTPS en Mg
2. Taq-polymerase, primers, glucose, en Mg
3. Primers, dNTP’s, Taq-polymerase en Mg
4. dNTP’s, zuurstof e ATP

Sleep de temperatuur en functie naar de juiste stap.

Denaturatie

Annaeling

Extension

72 °C 

95 °C 

50 - 65 °C 

Primers binden aan het DNA

Nieuw DNA wordt gesynthetiseerd (gemaakt)

DNA wordt enkelstrengs gemaakt

Uitleg cijfers [als ze het vragen]