Les 7 - SDS-PAGE & Western blot

• New lesson editor
• Biologie
• MBO
• Studiejaar 2

Eerst een paar vragen...

Een ELISA is een kwalitatieve techniek waarmee je alleen kunt bepalen of een antigeen aanwezig is.

• 
  

A

Juist

B

Onjuist

Zet de stappen van de ELISA op de juiste volgorde

1

Blocking

2

Coating met antigeen

3

Detectie

4

Antilichamen toevoegen

Wat gebeurt er met het signaal in een indirecte ELISA als er veel antigenen aanwezig is?

A

Het signaal wordt sterker

B

Het signaal blijft gelijk

C

Het signaal wordt zwakker

D

Er is geen effect

Bij een directe ELISA wordt er maar één antilichaam gebruikt, die gekoppeld is aan een enzym.

A

Waar

B

Niet waar

Bij een sandwich ELISA worden de antigenen gevangen tussen twee antilichamen.

A

Waar

B

Niet waar

Eiwitscheiding en detectie: SDS-PAGE & Western blot

Wat weet je al over het scheiden van eiwitten?

Leerdoelen

Aan het einde van deze les kun je

• uitleggen hoe SDS, β-mercapto-ethanol en verhitting zorgen voor denaturatie,

• beschrijven hoe SDS-PAGE eiwitten op grootte scheidt,

• de stappen van een Western blot uitleggen

• het verschil benoemen tussen SDS-PAGE en Western blot.

Wat is SDS-PAGE?

SDS-PAGE scheidt eiwitten op grootte via een polyacrylamidegel. Alle eiwitten krijgen dezelfde negatieve lading dankzij SDS.

Denaturatie voor SDS-PAGE

SDS denatureert eiwitten en geeft ze negatieve lading. β-mercapto-ethanol breekt disulfidebruggen. Verhitting zorgt voor volledige ontvouwing.

Wat is de functie van SDS in een SDS-PAGE?

A

Het knipt eiwitten in kleinere stukken.

B

Het geeft eiwitten een negatieve lading en ontvouwt ze.

C

Het maakt disulfidebruggen tussen eiwitten.

D

Het kleurt eiwitten zichtbaar blauw.

Scheiding in de gel

Alle eiwitten bewegen naar de positieve pool. Kleine eiwitten bewegen sneller, grote eiwitten langzamer door de moleculaire zeef van de gel.

Welke eiwitten bewegen het snelst door de gel tijdens een SDS-PAGE?

A

Grote eiwitten, omdat ze meer lading dragen.

B

Grote eiwitten, omdat ze beter door de poriën passen.

C

Kleine eiwitten, omdat ze minder weerstand ondervinden in de gel.

D

Kleine eiwitten, omdat ze positief geladen zijn.

Van SDS-PAGE naar Western blot

SDS-PAGE laat zien welke eiwitten er zijn. Met Western blot kun je specifieke eiwitten zichtbaar maken dankzij antilichamen.

Western blot: 4 stappen

1. Scheiding op grootte (SDS-PAGE)

2. Transfer naar membraan

3. Blocking van vrije plekken

4. Detectie met antilichamen

Zet de stappen van de Western Blot op de juiste volgorde.

1

Detectie met antilichamen

2

Scheiding op grootte (SDS-PAGE)

3

Transfer naar membraan

4

Blocking van vrije plekken

Vergelijking: SDS-PAGE vs Western blot

Detecteert specifiek eiwit via antilichamen, laat alleen het doelwit zien.

Scheidt alle eiwitten op grootte, laat alle banden zien.

Western blot

SDS-PAGE

Vragen?