FO - DNA gelelektroforese

• Natuur, Leven en Technologie
• Voortgezet speciaal onderwijs
• Leerroute 4

FO - DNA gelelektroforese

DNA analyse bij Forensisch Onderzoek

FO - DNA gelelektroforese

Wat gaan we doen?

• 1% agarose gel maken.
• DNA monsters laden in de slotjes   van de gel.
• 1x TAE als elektroforese-buffer   toevoegen.
• Stroom op de buffer voor scheiding   van dna-fragmenten.
• Zichtbaar maken van de DNA fragmenten door kleuring.

FO - DNA gelelektroforese

1% agarose opgelost in 50 mL 1x TAE-buffer

• Eerst de 1x TAE buffer maken.

     De stock-oplossing is 50x TAE. 

     Om 50 mL 1x TAE te maken, 

     doe je .... mL 50x TAE + .... mL demi-water. 

• Hoeveel agarose afwegen?

     1% = 1 gr / 100 mL

     Dus voor 50 mL weeg je .... gr agarose af.

• Voeg de agarose bij de 1x TAE-buffer.

• DNA monsters laden in de slotjes   van de gel.
• 1x TAE als elektroforese-buffer   toevoegen.
• Stroom op de buffer voor scheiding   van dna-fragmenten.
• Zichtbaar maken van de DNA fragmenten door kleuring.

Altijd eerst uitschrijven wat je gaat doen voordat je gaat beginnen!!

1% agarose in 50 mL 1x TAE-buffer

FO - DNA gelelektroforese

1% agarose in 50 mL 1x TAE-buffer

• Eerst de 1x TAE buffer maken.

     De stock-oplossing is 50x TAE. 

     Om 50 mL 1x TAE te maken, 

     doe je 1 mL 50x TAE + 49 mL demi-water. 

• Hoeveel agarose afwegen?

     1% = 1 gr / 100 mL

     Dus voor 50 mL weeg je 0,50 gr agarose af.

• Voeg de 0,50 gr agarose bij de 50 mL 1x   TAE-buffer.

• DNA monsters laden in de slotjes   van de gel.
• 1x TAE als elektroforese-buffer   toevoegen.
• Stroom op de buffer voor scheiding   van dna-fragmenten.
• Zichtbaar maken van de DNA fragmenten door kleuring.

Altijd eerst uitschrijven wat je gaat doen voordat je gaat beginnen!!

FO - DNA gelelektroforese

Agarose-gel gieten

• Kook de agarose-oplossing op in de magnetron. Even kort goed laten doorkoken (dit kan je zien door de wat grotere belletjes) 
  

• De oplossing is erg heet, dus pas goed op!   Laat de oplossing afkoelen totdat je het net   in je hand kan houden. 

• Maak ondertussen je geltray klaar (afsluiten   met rubber blokjes en kam er in). 
• Giet de warme agarose-oplossing in je   geltray. Laat dit afkoelen tot kamer-   temperatuur. 
  

FO - DNA gelelektroforese

We gebruiken 400 mL 1x TAE als buffer.

Dat gaan we maken van de 50x TAE.

• 50x TAE moet .... x verdund worden om 1x TAE te krijgen.

• Voor 400 mL geldt dan .... mL 50x TAE 

     + ..... mL demi-water. 

Altijd eerst uitschrijven wat je gaat doen voordat je gaat beginnen!!

Elektroforese-bak klaarmaken

FO - DNA gelelektroforese

Elektroforese-bak klaarmaken

We gebruiken 400 mL 1x TAE als buffer.

Dat gaan we maken van de 50x TAE.

• 50x TAE moet 50 x verdund worden om 1x TAE te krijgen.

• Voor 400 mL geldt dan 8 mL 50x TAE 

     + 392 mL demi-water. 

Altijd eerst uitschrijven wat je gaat doen voordat je gaat beginnen!!

FO - DNA gelelektroforese

Elektroforese-bak klaarmaken

• Leg de gel zonder kam en rubbers op     de juiste manier in de elektroforese-bak.

     DNA is negatief geladen (want het is             een zuur, dus een -COOH groep).

• Giet de 400 mL 1xTAE voorzichtig in de   elektroforese-bak zodat de gel volledig   onder staat.  

FO - DNA gelelektroforese

DNA laden in de gel

• In de strip zitten de dna-samples. Tik even zachtjes met de strip op tafel   zodat alle vloeistof op de bodem komt. 
• Stel de micropipet in op 35 uL (microLiter), prik met het gele puntje door   de folie heen en pipeteer voorzichtig alle dna-vloeistof uit één sample op. 
• Pipeteer heel voorzichtig de vloeistof in het eerste slotje van je gel. 
• Doe (op volgorde) hetzelfde met de overige dna-samples. 

FO - DNA gelelektroforese

DNA-elektroforese

• Doe de deksel op de elekroforese bak. 
• Sluit de connectors aan op de voeding.
• Zet het voltage op 100 Volt. 
• Na een uur zou het resultaat zichtbaar moeten zijn. 

FO - DNA gelelektroforese

Analyseer de gel

• Welk dna zat in welke laan?
• Zie je overeenkomsten tussen de verschillende lanen?
• Wat voor conclusie kun je hieraan verbinden?

FO - DNA gelelektroforese

Analyseer de gel

• Vergelijk laan 1 (PD) met laan 3 (verdachte 1) en met 

     laan 5 (verdachte 2): Beide verdachten komen overeen             met het PD. 

• Vergelijk laan 2 (PD) met laan 4 (verdachte 1) en met 

     laan 6 (verdachte 2). Alleen laan 6 (verdachte 2) komt               overeen met PD. Dit maakt verdachte 2 meer verdacht en         zou op grond hiervan een huiszoekingsbevel gegeven               kunnen worden.