Aseptisch werken

• Microbiologie
• MBO
• Studiejaar 3

Waar denk je aan bij
"aseptisch werken"?

Aseptisch werken

Doel:

Alleen werken met micro-organismen waarmee gewenst wordt om te werken

Goede microbiologische technieken 

Geen micro-organismen van buitenaf mogen de resultaten beïnvloeden

Veilige microbiologische technieken

Geen besmetting voor omgeving en onderzoeker

Wat is geen maatregel die genomen kan worden om steriel te werken?

1. Werken bij een brander
2. Hergebruik van materialen
3. Handen wassen
4. De ruimte behandelen met UV-straling

LAF-kast

Laminar airflow kast

Gebruik bij gevoelig materiaal

00:11

Wat geven de blauwe en groene pijlen aan?

1. Blauw is steriele lucht, Groen is lucht van buitenaf
2. Groen is steriele lucht, Blauw is lucht van buitenaf
3. Blauw en groen zijn beide steriele lucht
4. Er is geen verschil qua betekenis

02:08

Hoe zorg je er voor dat het flowkast het beste werkt?

1. Het maakt niet uit waar je de materialen legt in de kast
2. Aan de randen is de lucht het meest steriel, dus daar moet je werken
3. Zoveel mogelijk de luchtgaten vrij houden
4. Het raam moet zoveel mogelijk open, zodat je vrij kan bewegen

Sterilisatie

Doel: alle micro-organismen doden of verwijderen

Hittesterilisatie

Autoclaaf of snelkookpan

15 - 20 minuten

121 ^oC

Droge sterilisatie

Oven

2 -  4 uur

170 ^oC

Flamberen

Brander

Hoog kiemdodend effect

öse, halzen van buizen en flessen

Tyndaliseren

Niet boven de 100 ^oC

Herhaling

Vernietiging van sporen

Filtratie

Poriën kleiner dan micro-organismen

Bij stoffen die niet tegen hitte kunnen

Stoffen worden later aan voedingsmedium toegevoegd

Gamma-straling

Plastic materialen

Kobalt-60-isotoop

Welke type sterilisatie gebruik je voor pipetpunten?

1. Hittesterilisatie
2. Droge sterilisatie
3. Flamberen
4. Tyndaliseren

Welke type sterilisatie gebruik je bij hitteinstabiele stoffen?

1. Hittesterilisatie
2. Droge sterilisatie
3. Tyndaliseren
4. Filteren

Desinfecteren

Materialen die niet gesteriliseerd kunnen worden

Kiemarm

Oppervlakken

70% ethanol of isopropanol

Chlooroplossing

Waterstofperioxide

Lucht

Filters in luchtcirculatiesysteem

UV-straling

Huid

Water en desinfecterende zeep

Drogen met papieren handdoekjes

00:14

Waarom zou je het water even moeten laten doorstromen?

01:03

Hoe gaat ze haar handen droog maken?

01:32

Wees eens eerlijk... was jij altijd zo je handen?

1. Ja
2. Nee
3. Ik wist niet dat het zo moest

Kleding

Wassen

Behandelen met waterdamp en formaline bij 60^oC

Wat is geen goed antwoord op de vraag:

Waarom gebruik je 70% ethanol en geen 96%?

1. 70% bevat meer water, door osmose gaat de bacterie dood
2. 96% veroorzaakt stolling van eiwitten waardoor de alcohol de cel niet in kan
3. 70% ruikt minder sterk dan 96%
4. 96% verdampt sneller

Waar denk je aan bij
"kwaliteitscontrole"?

Kwaliteitscontrole

Betrouwbaarheid

Reproduceerbaarheid

Wat was reproduceerbaarheid ook al weer?

Handelingen

Niet exact te meten

Kwaliteit op andere punten waarborgen

Voorschriften of protocollen

Vermeldt welke methode er gevolgd moet worden

• kweekmethoden
• biochemische identificatie
• gevoeligheidsbepalingen
• antigeen-antilichaamonderzoek
• controlevoorschriften

Hoe zou je de steriliteit kunnen controleren van een medium?

Voedingsmedia

Bereidingsdatum

Vervaldatum

Controle steriliteit

Periodieke controles

pH

Bacteriegroei

Hemolyse

Kwaliteit

Ecogram 

1 ul cultuur

5 kwadranten

absolute groei index

Reagentia

Volgens voorschrift bewaren

Testen van werking met controles

Gevoeligheidsbepaling

Dikte bodem

pH bodem 

Apparatuur

Temperatuur 

Onderhoudsplan

Autoclaaf

Sporenstrips

Hittegevoelig tape

Welke controle hoort bij welk materiaal 

Steriliteit medium

Kwaliteit medium

Temperatuur

Blanco meenemen

Ecogram

Controlekaart