Zelfstandig: Praktijkvoorbereiding Les 3 BMI

Zelfstandig: praktijkvoorbereiding.

In deze praktijkvoorbereiding maak je je pipetteerschema en bereid je je alvast voor op de praktijklessen van zowel vrijdag 16 mei als 23 mei 2025.

We beginnen eerst met de praktijkvoorbereiding voor vrijdag 16 mei 2025.

Planning vrijdag 16 mei

- agarose gel runnen voor PCR van Alu insert

- PCR runnen voor PTC1

Stappen runnen agarose gel voor PCR Alu insert

1,5% agarose gel maken in 1x TAE met 2 tot 3 µl SYBR safe -> 16 µl PCR product met 4 µl loading dye -> breng marker en product op de agarose gel -> bekijk resultaten

Voor de PCR van het Alu insert moet je eerst een gel maken. Deze gel moet je 1,5% agarose in 1x TAE buffer doen (totaal volume 50 mL). Leg uit hoe je dit gaat doen.

Maak de pipetteerschema voor het inzetten van de PCR.

Eerst een voorbeeld voor jullie met de formule
C1 * V1 = C2 * V2.

C₁ = 30 mM (beginconcentratie MgCl₂)

V₁ = ? (hoeveel volume je daarvan moet nemen)

C₂ = 1.5 mM (gewenste eindconcentratie van MgCl₂ voor PTC1)

V₂ = 50 µL (eindvolume waarin je de gewenste concentratie wil hebben)
Vul formule in:

30 * ? = 1,5 * 50

? = (2,5 * 50) / 30
? = 2,5 µL nodig van 30 mM stock MgCl₂

Hoe bereken je ook alweer hoeveel µL je van je DNA nodig hebt voor de PCR (15 ng nodig)?

Maak nu de pipetteerschema af.

Hoeveel µl van 2 mM dNTPs voeg je toe om een concentratie te krijgen van 0,1 mM in 50 µl?

1. 2,5
2. 2
3. 20
4. 2

Vraag je docent om een speciaal papiertje dat gebruikt wordt om je smaakgevoeligheid te testen.
Met dit papiertje kun je een verwachting stelling over de type taster dat je bent. Er zijn drie mogelijkheden: 1. Je proeft niets of alleen papier, 2. Je proeft een milde bittere smaak, 3. Je proeft een sterke bittere smaak

Proef het papiertje en beschrijf wat je proeft.

Op basis van het proeven van het papiertje kun je nu een verwachting stellen.

Wat voor type taster ben je?

1. Je proeft niets of alleen papier → je bent waarschijnlijk een non-taster.
2. Je proeft een milde bittere smaak → je bent waarschijnlijk een milde taster.
3. Je proeft een sterke bittere smaak → je bent waarschijnlijk een taster.

De gevoeligheid van je smaak wordt bepaald of je wel of niet het PCR receptor hebt. Er zijn drie mogelijkheden:
TT → taster (wel PTC receptor)
Tt → mild taster (deels wel/deels niet PTC receptor)
tt → non-taster (geen PTC receptor)
Op basis van wat je hebt geproefd, wat verwacht je dat je genotype gaat zijn?

1. TT → taster (wel PTC receptor)
2. Tt → mild taster (deels wel/deels niet PTC receptor)
3. tt → non-taster (geen PTC receptor)

Zo interpreteer je je resultaten:

• Taster (TT): Wel PTC receptor. Twee bandjes: 176 en 45 bp.
• Mild taster (Tt): Deels PTC receptor. Drie bandjes: 221 bp, 176 bp, 45 bp.
  
• Non-taster: Geen PTC receptor. 221 bp.

Hoeveel bandjes verwacht je te zien bij je eigen DNA?

Nu komen er vragen over het tweede praktijkles op vrijdag 23 mei.

Planning op vrijdag 23 mei:

- restrictie enzym analyse van PCR PTC1 (wat je in de vorige slides hebt voorbereid)

- agarose gel runnen voor de restrictie enzym analyse PTC1
- nieuw PCR runnen voor PTC2 

Voor de restrictie enzym analyse op vrijdag 23 mei moet je een aantal stoffen toevoegen in een epje. Sleep de juiste volumes naar de stoffen. Gebruik blz. 12 van je praktijkbundel.

Restrictie enzym HaeIII

PCR product

Restrictiebuffer

steriele MilliQ

3 µL

6 µL

1 µL

20 µL

Waarom doe je een restrictie enzym analyse?

Nu moet je 2% agarose gel gaan gebruiken. Hoe bereid je dit voor?

1. 1 gram agarose in 50 mL 1x TAE
2. 1 gram agarose in 100 mL 1x TAE
3. 2 gram agarose in 50 mL 1x TAE
4. 2 gram agarose in 100 mL 1x TAE

Maak nu de pipetteerschema van PCR voor PTC2. Let op: eindconcentratie MgCl is anders.

Je bent klaar met deze LessonUp.

Maak nu een overzicht voor jezelf hoe je de praktijkles van 16 mei en 23 mei gaat aanpakken.

Maak dus een korte flowchart.